产品描述
10×HOLMES Buffer 1是适用于Cas12蛋白反式切割反应的专用缓冲液。该反应缓冲液的成分经过优化，可有效提升Cas12蛋白的反式切割活性，而不影响其检测靶标的特异性，因此，可被用于Cas12介导的CRISPR诊断反应体系。常见的Cas12家族蛋白，如Cas12a（Cpf1）、Cas12b（C2c1）和Cas12f（Cas14）等，均可使用HOLMES Buffer 1作为反应缓冲液。
实验流程
以LbCas12a反式剪切实验为例(20 µL反应体系，需加入10×HOLMES Buffer 1的体积为2 µL)：
组分 | 体积 | 终浓度 |
10 × HOLMES Buffer 1 | 2 μL | 1 × |
10 μM LbCas12a Nuclease | 0.05~0.5 μL | 25~250 nM |
10 μM crRNA | 0.05~0.5 μL | 25~250 nM |
1 μM Target DNA | 0.5~5 μL | 25~250 nM |
10 μM ssDNA Reporter | 0.05~0.5 μL | 25~250 nM |
Nuclease-free Water | Up to 20 μL |
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◆ 反式剪切体系中各组分的用量可以根据不同的实验目的进行调整，用量较少时可先将各组分稀释后加入体系，LbCas12a Nuclease可用1×HOLMES Buffer 1稀释，稀释后需立即使用（若要稀释后的Cas12酶长期保存，请使用Cas12 Dilution Buffer，#32012），crRNA、Target DNA及ssDNA Reporter可用Nuclease-free Water稀释，但极低浓度的Target DNA（例如LOD实验）建议用0.1% Tween 20稀释并使用低吸附的离心管、吸头等耗材。
实时荧光定量PCR仪检测荧光信号，37℃反应，每30 sec采集一次荧光信号。
组分 | 32005 |
● 10×HOLMES Buffer 1 | 5×1 mL |
a.SpCas9 H840A Nickase浓度为10 μM，即10 pmol/μL，100 pmol规格的总体积为10 μL，1,000 pmol规格的总体积为100 μL；
保存条件
4℃储存；常温运输。
生化试剂
