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10×HOLMES Buffer 2是适用于Cas13蛋白反式切割反应的专用缓冲液。该反应缓冲液的成分经过优化，可有效提升Cas13蛋白的反式切割活性，而不影响其检测靶标的特异性，因此，可被用于Cas13介导的CRISPR诊断反应体系。常见的Cas13家族蛋白均可使用HOLMES Buffer 2作为反应缓冲液。
以LwaCas13a反式剪切实验为例(20 µL反应体系，需加入10×HOLMES Buffer 2的体积为2 µL)：
组分
体积
终浓度
10 × HOLMES Buffer 2
2 μL
1 ×
10 µM LwaCas13a Nuclease
0.05~0.5 μL
25~250 nM
10 µM crRNA
10 µM Target RNA
10 µM ssRNA Reporter (FAM-BHQ1)
Nuclease-free Water
Up to 20 μL
◆ 反式剪切体系中各组分的用量可以根据不同的实验目的进行调整，用量较少时可先将各组分稀释后加入体系，LwaCas13a Nuclease可用1×HOLMES Buffer 2稀释，稀释后需立即使用（若要稀释后的Cas13酶长期保存，请使用Cas13 Dilution Buffer，#32013），crRNA、Target RNA及ssRNA Reporter可用Nuclease-free Water稀释，但极低浓度的Target RNA（例如LOD实验）建议用0.1% Tween 20稀释并使用低吸附的离心管、吸头等耗材。实时荧光定量PCR仪检测荧光信号，37℃反应，每30 sec采集一次荧光信号。
32006
● 10×HOLMES Buffer 2
5×1 mL
4℃储存；常温运输。
生化试剂
