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LwaCas13a(又名C2c2)是依赖于crRNA单独介导的RNA内切核酸酶,来源于Leptotrichia wadei菌株。可特异地识别并剪切靶标单链RNA,且对PFS序列的要求并不严格。此外,Cas13a也具有反式剪切活性(即旁路剪切活性/附属剪切活性),即当LwaCas13a蛋白与crRNA、靶标RNA结合形成三元复合物后,便会被激活针对非特异序列单链RNA的反式剪切活性,将体系中的任意序列单链RNA切碎。该活性也被用于靶标核酸的快速检测试剂盒的开发。例如,Broad研究所的张锋团队便利用Cas13a蛋白开发了名为“SHERLOCK”的下一代分子诊断系统(详细信息请参考PMID: 28408723) 。
✽ 标准化定义的反式剪切活性:在总体积为20 μL的1 × HOLMES Buffer 2 [pH 7.6]反应体系中,37℃反应条件下,1 min内剪切1 pmol ssRNA探针所需的Cas13a酶量定义为1 transU。本公司提供的Cas酶transU数值可于COA检测报告中查询。