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AapCas12b(又名C2c1)是依赖于crRNA和tracrRNA共同介导的(或融合后的sgRNA单独介导的)DNA核酸内切酶,来源于嗜酸耐热菌Alicyclobacillus acidophilus,是由tracrRNA:crRNA(或sgRNA)介导的DNA核酸内切酶,在靶标双链DNA存在PAM (TTN) 序列的情况下,剪切反应温度可达60~65℃。在靶标双链DNA存在PAM(5’-TTN-3’)的情况下,可特异地剪切靶标双链DNA,使DNA双链断裂并生成粘性末端。而AapCas12b特异地剪切单链DNA靶标不依赖PAM序列。此外,双链或单链DNA靶标均能激活AapCas12b的反式剪切活性(即旁路剪切活性/附属剪切活性),即当AapCas12b酶与sgRNA、靶标DNA结合形成三元复合物后,便会被激活针对非特异序列ssDNA的反式剪切活性,可无差别地剪切反应体系中任意序列的ssDNA。AapCas12b比AacCas12b (#32116)更耐高温。因此,也更适用于与LAMP联用,开发“一步法”恒温扩增/CRISPR-Cas检测体系(详细信息请参考PMID: 32937062)。
✽ 标准化定义的反式剪切活性:在总体积为20 μL的1 × HOLMES Buffer 1 [pH 8.5]反应体系中,48℃反应条件下,1 min内剪切1 pmol ssDNA探针所需的Cas12b酶量定义为1 transU。本公司提供的Cas酶transU数值可于COA检测报告中查询。