检测甘油三酯及其代谢对了解代谢性疾病的机制具有重要意义。传统检测脂质代谢的方法，如染色法、比色法或荧光法以及质谱法都已经得到应用，但每种方法都有其局限性。

　　哺乳动物利用脂质（主要是甘油三酯）来长期储存能量。在用餐后，人体合成甘油三酯来储存多余的能量，在空腹期间甘油三酯分解来为身体的所有细胞提供能量。甘油三酯的合成（脂肪生成）和分解（脂肪分解）是由激素介导的信号级联紧密调节的。

三、在糖尿病研究中监测胰岛素活性图.脂肪生成和脂肪分解作用。甘油三酯分子由三个高能脂肪酸与一分子甘油酯化形成。甘油三酯的合成称

为脂肪生成，而甘油三酯的分解称为脂肪分解。

　　许多疾病状态下可以观察到甘油三酯代谢失调，包括糖尿病、肥胖、肝病（如肝脏脂肪变性、NAFLD、NASH）和癌症。为了更好地理解和开发以上提到的疾病和其他疾病的治疗方法，研究人员需要检测工具来监测生物样本中的甘油三酯代谢。脂肪生成是通过检测甘油三酯水平的变化来测量的，而脂肪分解通常是通过检测甘油水平的变化来测量的。

　　一、检测甘油三酯代谢的传统方法

　　1. 染色

　　许多疾病状态下可以观察到甘油三酯代谢失调，包括糖尿病、肥胖、肝病（如肝脏脂肪变性、NAFLD、NASH）和癌症。为了更好地理解和开发以上提到的疾病和其他疾病的治疗方法，研究人员需要检测工具来监测生物样本中的甘油三酯代谢。脂肪生成是通过检测甘油三酯水平的变化来测量的，而脂肪分解通常是通过检测甘油水平的变化来测量的。

　　2. 基于微孔板的比色法和荧光检测法

　　许多疾病状态下可以观察到甘油三酯代谢失调，包括糖尿病、肥胖、肝病（如肝脏脂肪变性、NAFLD、NASH）和癌症。为了更好地理解和开发以上提到的疾病和其他疾病的治疗方法，研究人员需要检测工具来监测生物样本中的甘油三酯代谢。脂肪生成是通过检测甘油三酯水平的变化来测量的，而脂肪分解通常是通过检测甘油水平的变化来测量的。

　　2. 质谱分析

　　光谱测定方法可以提供一个完整的“脂质组”的图片——在一个生物样品中存在的所有脂质种类。这些实验产生了大量的定量数据集合，可以用来描述脂质代谢过程。

　　二、生物发光测定监测甘油三酯代谢

　　光谱测定方法可以提供一个完整的“脂质组”的图片——在一个生物样品中存在的所有脂质种类。这些实验产生了大量的定量数据集合，可以用来描述脂质代谢过程。

　　实验原理及步骤

　　这两种方法的核心是甘油分子数量和产生光信号的相关性。仅针对Triglyceride-Glo™ Assay，需要初始脂肪酶处理将甘油三酯转化为甘油。然后，在两个实验中，一对酶（甘油激酶和甘油-3-磷酸脱氢酶）氧化甘油生成NADH。接下来，一种还原酶利用NADH还原酶将萤光素底物前体转化为萤光素。最后，Ultra-Glo™rLuciferase氧化萤光素产生可见光。产生的光信号可以通过发光检测仪测量，并与开始样品中甘油三酯/甘油的数量呈现相关性。Ultra-Glo™rLuciferase酶无论在去污剂、还原剂或温度波动的情况下都可以持续的发出明亮的光，所以该分析方法输出是稳健的，并且适用于多种样品类型。

　　Triglyceride-Glo™ Assay和 Glycerol-Glo™ Assay有一个简单的操作方案：只需向样品中添加试剂，孵育，并使用任何具有读板功能的发光检测仪。制备样品不需要有机萃取、极端温度或高速离心。相反，检测使用一个简单的30分钟去污剂裂解步骤。细胞培养实验中，检测试剂可直接加入含有细胞的孔中，也可把细胞培养基取出加入单独的平板进行培养基检测。后一种方法使培养的细胞可用于另外的下游实验检测，如检测其他代谢物或细胞活力。此外，Triglyceride-Glo™ Assay和 Glycerol-Glo™ Assay可用于384孔板的高通量筛选应用。

　　三、在糖尿病研究中监测胰岛素活性

　　胰岛素是脂质代谢的关键调节剂。在肝细胞和脂肪细胞中，它促进脂肪生成并抑制脂肪分解。使用 Triglyceride-Glo™ 和 Glycerol-Glo™ Assays，您可以监测胰岛素和其他效应物对脂质代谢的影响。在下图中，Glycerol-Glo™ Assay 用于监测脂肪细胞中的脂肪分解。用异丙肾上腺素处理会增加基础水平以上的脂肪分解。用异丙肾上腺素和胰岛素处理也导致脂肪分解的增加，但增加少于单独使用异丙肾上腺素。通过这种方式，Glycerol-Glo™ Assay 可用于评估脂肪分解的激活剂和抑制剂。

　　图. 胰岛素介导的脂肪细胞甘油释放抑制。从 3T3-L1 MBX 细胞分化而来的脂肪细胞用异丙肾上腺素 (25nM) 和胰岛素 (150nM) 的组合处理。处理 90 分钟后，从每个孔中取出培养基样品并使用 Glycerol-Glo™Assay进行检测。每个条件一式三份进行测试，误差线代表标准偏差。

　　三、在糖尿病研究中监测胰岛素活性

　　BSA结合的脂肪酸和脂蛋白通过脂肪生成刺激肝细胞内甘油三酯的积累。在本研究中，我们使用Triglyceride-Glo™ Assay来监测人肝脏3D微组织中在不同药物处理条件及时间下甘油三酯的含量。结果表明，Triglyceride-Glo™ Assay可用于监测细胞模型中脂肪变性的进程。

　　图. 人肝脏微组织中的甘油三酯水平。将 3D InSight™ 人肝脏微组织（MT，InSphero，~1150 个细胞 / 孔）在无血清培养基中孵育3 天和 10 天，培养基含有生理（LG/LI）或超生理（LG/HI）水平的葡萄糖和胰岛素，以及与 BSA 结合的游离脂肪酸（FFA）或低密度脂蛋白血浆组分（LDL）。将微组织在 PBS 中洗涤两次，并根据标准操作方法检测总甘油浓度，将数值绘制为每个微组织（MT）中甘油三酯的浓度。数据由瑞士苏黎世的 InSphero 公司提供。

　　五、小结

　　Triglyceride-Glo™ 和 Glycerol-Glo™ Assays 为需要测量脂肪分解和脂肪生成的研究人员提供了一种更好的方法。与比色法或基于荧光板的测定相比，它简单、无需洗涤的方案可实现更灵敏的生物发光检测。与繁琐的有机萃取不同，该检测使用快速去污剂裂解步骤来制备脂质样品。这些生物发光检测可以独立使用或补充其他脂质检测方法共同使用。

　　Promega代谢物检测平台

　　产品特点：

　　1. 适用于多种生物样品，如细胞培养基、组织、血清和组织裂解物等。

　　2. 发光法检测，灵敏度高，线性范围大：检测线性范围高达 80µM。

　　3. 无需有机萃取、高温或离心。

　　4. 操作简单，直接在板孔中进行。

　　甘油三酯检测产品：Triglyceride-Glo™ Assay

　　甘油检测产品：Glycerol-Glo™ Assay

　　胆固醇/胆固醇酯检测产品：Cholesterol/Cholesterol Ester-Glo™ Assay