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诺贝尔奖靶标MicroRNA与细胞活力检测
来源: | 作者:佚名 | 发布时间: 2025-01-22 | 93 次浏览 | 分享到:

 在遗传学中,微小RNA(microRNAs,miRNA)是一类进化上保守的非编码小分子RNA,长度一般在21-23个核苷酸之间,具有在翻译水平调控基因表达的功能。2024年来自马萨诸塞大学医学院的 Victor Ambros 和来自波士顿市麻省总医院及哈佛医学院的 Gary Ruvkun因发现微小 RNA(microRNA)及其在基因调控中的作用方面做出的开创性贡献获得诺贝尔生理学或医学奖。

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案例分析一

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在心力衰竭研究中,氧化应激损伤可导致MiR-147b下调Krüppel 样因子 13 进而促进心肌细胞凋亡。

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图表 1H2O2上调miR147表达促进细胞凋亡


      在本研究中,通过CTL试剂盒检测不同浓度H2O2处理下对心肌细胞活力的影响,图A表明在147.9μMol浓度下,半数抑制心肌细胞活性,图B检测不同浓度下miR147的表达含量,表明在150μMol下表达浓度最高,随着H2O2浓度增加心肌细胞死亡增加,导致miR147含量降低。

案例分析二

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在神经祖细胞损伤研究中表明,缺氧促进miR210外泌体的分泌,从而降低细胞活力。

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图表 1H2O2上调miR147表达促进细胞凋亡


      通过不同氧气浓度处理下,通过qPCR检测miR210外泌体随着氧气浓度降低而表达增加。

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Figure 2  12hVS24h,#P<0.05,24hVS48h,&P<0.05


      通过CTL试剂盒测不同氧外泌体处理12h,24h,48h后心肌细胞活力表明,随着miR浓度增加,细胞活力降低,通过miR210抑制剂可以有效恢复细胞活力,随着处理时间的延长,miR210逐渐降解细胞活力恢复。

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使用方法

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      CTL试剂盒具有极简的操作步骤,通过一步法将检测液与待测细胞培养液1:1等体积混合(96孔板各100μL),室温震荡2-3min,随后室温下孵育10min,最后上机检测。


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检测仪器

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      荧光素酶荧光可用发光检测仪或带化学发光检测模块的酶标仪直接检测。如:Modulus™ 单管型多功能检测仪、Modulus™ II 微孔板型多功能检测仪,Glomax Discover 多功能检测仪、SpectraMax Gemini EM 荧光酶标仪、Luminometer发光计、多功能酶标仪或者其他能够检测生物发光的仪器等。

      检测设置:Luminescence,350-700 nm,建议检测时间设为2-10 sec。萤火虫萤光素在氧化过程中发出560nm左右的生物荧光,海肾萤光素在氧化过程中发出480nm左右的生物荧光。


总结


      MicroRNA是当前研究热点,在生理功能中的应用广泛,通过CTL试剂盒能够很好地应用在microRNA与相关疾病的研究中,解开更多科研难题,助力人类健康事业的发展。