在生物科研中，免疫学相关实验是必不可少的技术手段。最常见的WB、ELISA、免疫组化、免疫荧光、流式分选等相关实验都涉及到了免疫相关的实验原理。

1. 免疫印迹(Western Blot,WB)

蛋白免疫印迹是生物研究中最基础最常见的一种技术手段，其原理是将蛋白质混合物通过SDS-PAGE电泳按分子量大小分离，转移到膜上，用特异性抗体识别目标蛋白，通过化学发光或显色进行检测。常应用于蛋白的定量分析、抗体特异性验证以及蛋白修饰分析

2. 酶联免疫吸附试验（Enzyme linked immunosorbent assay ，ELISA）

ELISA 是一种间接检测抗体与抗原结合的方法，通过酶催化底物显色或发光进行定量或定性检测。根据方法类型不同，ELISA可分为直接法、间接法、夹心法以及竞争性/抑制性 ELISA。

应用：

检测抗体： 如血清中针对特定病原体（病毒、细菌）的抗体（IgG, IgM, IgA等）、自身抗体。检测抗原： 如病原体抗原（乙肝表面抗原）、细胞因子、激素、肿瘤标志物。

3. 流式细胞术（Flow Cytometry, FC）

原理： 使单个细胞在液流中高速通过检测区，用激光照射，通过检测细胞产生的散射光和荧光信号来分析细胞的物理特性（大小、颗粒度）和生化特性（表面或胞内蛋白表达）。

应用：

免疫表型分析： 鉴定和分群血液、组织或培养细胞中的免疫细胞亚群（如T细胞、B细胞、NK细胞、树突状细胞及其亚群）。

细胞周期与凋亡分析：通过荧光染料分析DNA含量、细胞周期状态、凋亡标志物。

胞内因子检测： 检测细胞因子（IFN-γ, IL-2, TNF-α等）、转录因子、磷酸化信号蛋白。

细胞分选： 根据特定标记分选纯化目标细胞群体。

细胞功能分析： 如钙流检测、活性氧检测、增殖标志物（如CFSE稀释）检测。

4. 免疫组织化学 (immunohistochemistry，IHC)

原理： 在组织切片或细胞涂片/爬片上，利用特异性抗体与组织/细胞内的抗原结合，通过酶促显色反应或荧光标记使抗原位置可视化。

应用：

定位抗原表达： 确定特定蛋白（如CD3, CD20, Ki-67, 病毒抗原）在组织或细胞中的空间分布和表达水平。

疾病诊断与分型： 如肿瘤标志物检测、病原体鉴定。

亚细胞定位： 观察蛋白在细胞内的位置（胞膜、胞浆、胞核）。

5. 免疫荧光（Immunofluorescence，IF）

原理： 与IHC/ICC类似，但使用荧光素标记的抗体（或二抗），通过荧光显微镜观察抗原位置。

应用：

共定位研究： 同时标记多个抗原，观察它们在细胞内的空间关系。

活细胞成像： 动态观察活细胞中分子的运动和相互作用（常需更温和的固定或使用活细胞染料）。

高分辨率成像： 如共聚焦显微镜、超分辨显微镜下进行精细结构观察。

6. 免疫沉淀 / 免疫共沉淀（co-inmunoprecipitation，co-IP）

免疫沉淀： 利用抗体特异性结合溶液中的目标抗原（蛋白），并通过与固相支持物（如Protein A/G 磁珠）结合将其沉淀下来，用于纯化或富集特定蛋白。

免疫共沉淀： 在IP基础上，用于检测与目标蛋白存在相互作用的蛋白。如果蛋白B与蛋白A有相互作用，当用抗A抗体沉淀蛋白A时，蛋白B也会被一同沉淀下来。

应用：

蛋白纯化富集： 为后续分析（如质谱、WB）做准备。

验证蛋白相互作用： 经典方法验证两个蛋白是否在生理条件下结合。

研究蛋白复合物： 鉴定与目标蛋白相互作用的伴侣蛋白。

Pull-down： 用GST融合蛋白或生物素标记分子作为“诱饵”，捕获相互作用蛋白。

7. 酶联免疫斑点试验（ELISPOT ）

原理： 在包被了特定抗原（或捕获抗体）的微孔板中培养细胞，细胞分泌的抗体（或细胞因子）被捕获在细胞周围的膜上，通过酶联反应形成可见的斑点，一个斑点代表一个分泌该物质的细胞。

应用：

检测抗原特异性B细胞： 分泌抗体的B细胞。

检测抗原特异性T细胞： 分泌细胞因子（如IFN-γ, IL-4）的T细胞。

评估细胞免疫功能： 如疫苗免疫后特异性T细胞的应答频率。

8. 中和试验（neutralization test）

原理： 检测抗体（如血清）阻断病原体（病毒、细菌毒素）感染细胞或产生毒性的能力。

应用：

评估抗体功能： 检测中和抗体滴度，是评价疫苗效果和感染后免疫保护力的金标准之一。

抗体药物筛选与评价。

9. 淋巴细胞增殖实验（Lymphocyte proliferation assay）

原理： 检测淋巴细胞在特异性抗原或有丝分裂原刺激下发生增殖的能力。

方法：

³H-胸腺嘧啶核苷掺入法： 检测DNA合成，放射性标记。

MTT/XTT/CCK-8法： 检测细胞代谢活性。

CFSE稀释法： 用荧光染料标记细胞膜，细胞分裂时染料平均分配到子代细胞，通过流式检测荧光稀释程度来追踪增殖。

应用： 评估T细胞、B细胞对刺激物的反应性，反映细胞免疫功能状态。

10. 细胞毒性试验（cytotoxicity test）

在药物筛选及毒理学相关研究中，通过测定细胞的存活、膜完整性和细胞死亡等参数来评估毒性，可以检测效应细胞（如CTL、NK细胞）杀伤靶细胞的能力。

方法：

铬释放试验： 用放射性铬标记靶细胞，检测效应细胞杀伤后释放的铬。

LDH释放试验： 检测靶细胞被杀伤后释放的乳酸脱氢酶。

流式细胞术检测凋亡/坏死： 用Annexin V/PI等染料标记靶细胞，通过流式区分活细胞、凋亡细胞和坏死细胞。

应用： 研究CTL、NK细胞的杀伤功能，评估免疫治疗（如CAR-T）效果。

总结：

免疫学实验体系庞大且多样，涵盖从基础机制研究到临床应用诊断的广泛领域, 这些免疫实验技术相互补充，共同构成了免疫学研究强大的技术工具箱。免疫学实验技术日新月异，相互结合使用是常态（如流式+分选+scRNA-seq）。理解每种技术的原理、优势和局限性，是设计严谨实验方案和解读数据的基础。