抗体依赖性细胞吞噬作用(ADCP)是基于抗体的免疫疗法的一种重要作用机制。ADCP由复杂的检查点(包括SIRPα和CD47)网络调节,此网络有助于清除异常或被感染的细胞,同时保留健康组织。尽管ADCP具有重要的生理学作用,但SIRPα/CD47检查点也助长了肿瘤细胞免疫逃逸,许多肿瘤细胞过表达CD47而免于被吞噬。抑制SIRPα/CD47相互作用的大分子药物促进体外吞噬癌细胞,显示出有前景的疗效。
目前评价SIRPα/CD47检查点抑制剂活性的方法依赖于原代单核细胞来源的巨噬细胞和对吞噬作用的直接测定。由于主要使用供体细胞、操作步骤复杂以及检测试剂不合格,这些检测方法既费力又不准确。因此,这些检测很难在质量可控的环境中建立。
SIRPα/CD47 Blockade Bioassay是一款基于生物发光报告基因细胞的检测试剂盒,用于测定结合和阻断SIRPα和CD47相互作用的Fc沉默型或Fc缺失型配体和抗体的效能和稳定性。对于Fc功能型抑制剂,我们建议使用SIRPα/CD47 Blockade Bioassay, Fc-Dependent。
生物活性检测用组分和产品类型
该Blockade Bioassay检测系统使用两种基因工程细胞系:
SIRPα Effector Cells:单核细胞系,具有由FcγR和SIRPα/CD47通路依赖性反应元件驱动的稳定整合的NanoLuc® (NL)萤光素酶报告基因。
CD47/FcγR-A CHO-K1 Target Cells:经过基因工程改造的CHO-K1细胞,可表达人CD47及经基因工程改造的细胞表面蛋白(可激活FcγR)。
包括SIRPα Effector Cells和CD47 CHO-K1 Target Cells (CPM),这些是可以解冻和增殖的冷冻细胞,并且可储存供长期使用。
可与Bio-Glo-NL™ Luciferase Assay System配合使用。
可供计划扩大规模和储存CPM产品但希望接受普洛麦格提供的细胞扩增服务的客户使用。
当这两种细胞类型共培养时,SIRPα/CD47相互作用会抑制FcγR信号转导和启动子驱动的发光信号。加入Fc沉默型抗SIRPα抗体或抗CD47抗体会阻断SIRPα/CD47的相互作用,解除抑制信号,激活FcγR并产生启动子驱动的发光信号。