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CellTiter-Luc发光法细胞活力检测试剂盒产品介绍
来源: | 作者:佚名 | 发布时间: 2023-07-18 | 62 次浏览 | 分享到:

厚百生物生产的CellTiter-Luc发光法细胞活力检测试剂盒(CellTiter-Luc Luminescent Cell Viability Assay Kit),简称CTL发光法细胞活力检测试剂盒或CTL,是一种基于生物发光法测定细胞内ATP含量从而用于超高灵敏度、超宽线性范围定量检测活细胞数目的试剂盒。

本试剂盒的性能基本达到甚至在有些方面优于国外同类产品。本产品的用途与Promega公司的CellTiter-Glo® Luminescent Cell Viability Assay(简称CellTiter-Glo®或CTG)基本相同,检测灵敏度和发光检测数据显著优于以上国内外产品,线性范围和CTG相近。本产品与国内外产品检测效果比较参见图1

本产品线性范围宽。96孔板中,在20个至5万个细胞范围内有良好的线性关系(图1A)。不同细胞的检测数量上限会有显著不同。

本产品发光强度高。对于相同的细胞样品,如U937细胞样品,在2万个细胞数量范围内,本产品的发光效果比国内同类产品强1.6-4.2倍,略优于国外产品Competitor P(图C)。实测效果会因不同种类细胞而有所不同。例如,对于293T和U937细胞的检测,本产品的发光强度比国外产品Competitor P强约40%;对于U2OS细胞,本产品发光强度比国外产品Competitor P强约46%;而对于MDA-MB-231细胞的检测,发光强度则比国外产品Competitor P强约20%(图1D)。

本产品检测灵敏度高。对于MDA-MB-231细胞的检测,使用本产品检测细胞数量仅为20个/孔时,发光强度可达空白孔的20倍左右(图1A)。



图1. 本产品CellTiter-Luc Luminescent Cell Viability Assay Kit (CTL)和同类产品Competitor A、B-S、B-L、C及国外同类产品(Competitor P)对不同细胞的检测效果。图A为试剂盒对不同数量MDA-MB-231细胞在白色96孔板中的检测效果(20个~50000个细胞/孔)。图B为试剂盒和Competitor P对5000个/孔293T细胞在白色96孔板中的半衰期比较(约5小时)。图C为试剂盒和Competitor A、Competitor B(S产品、L产品)、Competitor C 、Competitor P对20000个/孔U937细胞在白色96孔板中的检测效果。图D为试剂盒和Competitor P对10000个/孔293T、MDA-MB-231、U2OS、U937细胞在白色96孔板中的检测效果。实际读数会因细胞种类、检测仪器等的不同而存在差异,图中数据仅供参考。

本产品操作简单,读数稳定,检测速度快,完成检测仅需约10分钟。本产品比常见的MTT、alamarBlue、Calcein-AM、WST-1、CCK-8等其它细胞活力测定方法更加简单快捷。只需把试剂盒提供的单一即用型试剂CellTiter-Luc发光法检测试剂与培养细胞等体积混合,反应10分钟后即可进行化学发光检测,无需洗涤细胞、更换或去除培养液,并且化学发光比较稳定。

本产品稳定性好。本试剂盒中的CellTiter-Luc发光法检测试剂稳定性好,反复冻融5次对检测效果下降不超过10%,反复冻融10次检测效果下降不超过20%。本产品4℃保存7天对检测效果无显著影响,4℃保存21天检测效果下降不超过10%。室温保存4天,仍可保留85%以上的检测效果。37℃保存1天,可保持90%以上的检测效果。

本产品使用灵活便捷。本产品不仅适合少量样品的检测,也同样适合大量样品高通量筛选(high-throughput screening)检测。

ATP是所有活细胞的能量来源,参与了许多重要的生化反应,如细胞通过主动运输摄入或排出各种矿质离子、动物及人体肌肉细胞的收缩、神经细胞的神经信号传递等过程均需要ATP提供能量。当细胞死亡时,停止合成ATP,因此ATP被广泛认为是活细胞的重要标志。本试剂盒是通过对ATP进行定量测定来检测培养物中活细胞数量的一种快速均质检测方法。均质的“加样-混合-检测”操作方法使得活细胞细胞裂解产生的发光信号与存在的ATP量成正比,而ATP量与培养基中活细胞数量成正比,继而根据发光信号值来分析细胞活力情况(检测原理参见图2)。



对于96孔板,推荐使用100μl细胞培养液和100μl的检测试剂,总体积为200μl,此时本试剂盒每10ml可以进行100次检测。对于384孔板,推荐使用25μl细胞培养液和25μl的检测试剂,总体积为50μl,此时本试剂盒每10ml可以进行400次检测。也可以用其它体积的试剂进行检测,但细胞培养液和检测试剂体积的比例须为1:1。

保存条件:

-20℃避光保存,至少一年有效。

注意事项:

1.本试剂盒的检测试剂中含有萤光素酶,反复冻融会导致其逐渐失活。尽管冻融5次内检测活性无影响,但为取得良好的使用效果,第一次解冻后可适当分装保存,值得注意的事分装的容器不能有ATP污染。另外试剂在反复冻融会有少许沉淀,操作时应尽量将试剂平衡至室温,完全溶解。

2.各种待测化合物溶剂可能会干扰萤光素酶反应,进而影响化学发光信号。对荧光素酶反应的干扰可以通过测定一组含有无细胞培养基的平行对照孔来检测。如二甲基亚砜(DMSO)通常被用作有机化学品的溶解载体,经测试,最终反应体系中DMSO含量在2%以内不会对反应产生影响。

3.检测时尽量使用白色96孔板或384孔板。如果使用普通透明的96孔板或384孔板,相邻孔之间会产生相互干扰,对实验数据会造成一定的误差。

4.使用说明中提供了检测ATP标准品的方法,而实际检测细胞活力时通常并不需要检测ATP标准品。

本产品仅限于专业人员的科学研究用,不得用于临床诊断或治疗,不得用于食品或药品,不得存放于普通住宅内。

5.为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。